Metoda biuretowa to spektrofotometryczna metoda oznaczania zawartości białka w próbce. Opiera się na reakcji wiązań peptydowych białek z jonami miedzi(II) w środowisku zasadowym.
Zasada metody
W środowisku alkalicznym jony Cu²⁺ tworzą z wiązaniami peptydowymi białek kompleks o barwie fioletowej. Intensywność zabarwienia jest proporcjonalna do stężenia białka w badanej próbce.
Pomiar wykonuje się za pomocą spektrofotometru, zwykle przy długości fali około 540–560 nm.
Do czego służy?
Metoda biuretowa służy do ilościowego oznaczania białka, np. w:
- surowicy krwi,
- mleku i produktach spożywczych,
- preparatach białkowych,
- próbkach biologicznych.
Typowy przebieg oznaczenia
- Przygotowuje się próbkę badaną i roztwory wzorcowe białka.
- Dodaje się odczynnik biuretowy.
- Po określonym czasie mierzy się absorbancję roztworu.
- Zawartość białka odczytuje się z krzywej wzorcowej lub oblicza na podstawie zależności absorbancji od stężenia.
Ważne na egzaminie
Jeżeli w pytaniu pojawia się oznaczanie całkowitej zawartości białka przy użyciu spektrofotometru, prawidłową odpowiedzią jest najczęściej metoda biuretowa.